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佛羅倫薩大學可以追溯到1321年由佛羅倫薩共和國建立的大學。最初，民法和教規、文學和醫學都是在該研究所教授的科目，并邀請了許多著名的學者在那里授課：吉奧瓦尼·博卡喬被邀請去講授神曲。然而，1349年，波波·克萊門特六世（Popo Clemente VI）用公牛充分認識到了該研究所的重要性，他正式授權該研究所授予普通學位，擴大了最高特權，并確定第一個意大利神學學院將設在佛羅倫薩。1364年，在卡洛七世皇帝的帶領下，佛羅倫薩的學府變成了一所帝國大學。然而，當洛倫佐大帝控制了佛羅倫薩和托斯卡納的大部分地區后，1473年，這間書房搬到了比薩。卡洛八世從1497-1515年將其移回佛羅倫薩，但隨著美第奇家族的回歸，它再次被轉移到比薩。盡管采取了這些措施，許多教學活動仍在佛羅倫薩繼續進行，科學研究在當時的各種學院中得到了實質性的支持，如克魯斯卡和西門托。直到1859年，當大公被流放時，所有這些獨立的教學活動才重新統一在一個叫做“Studito di Studi Pratici e di Perfezionamento”的合適系統中；一年后，這所學校被意大利統一政府承認為一所成熟的大學。1923年，根據議會的一項特別法案，該學院被正式命名為一所大學。后來，這所新的大學被組織成不同的學院：農業、建筑、藝術、經濟、教育、法律、數學、物理和自然科學、醫學和外科、藥學和政治學。工程學院自1928年開始開設2年課程，1970年增加到10個學院。

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